用于(yu)外(wai)泌(mi)(mi)(mi)体(ti)(ti)提取(qu)的(de)(de)(de)体(ti)(ti)液(ye)收(shou)集注(zhu)意事项(xiang)(xiang)：1、抽血(xue)(xue)(xue)(xue)技巧。操作要轻柔迅速(su)。试(shi)(shi)(shi)管可翻转8-10次使样本(ben)与抗(kang)凝剂(ji)混(hun)匀(yun)，避(bi)免(mian)剧烈摇晃。混(hun)匀(yun)后(hou)，将试(shi)(shi)(shi)管固(gu)定(ding)垂直放置于(yu)离(li)心(xin)分离(li)器，在(zai)(zai)顶部(bu)记录抽血(xue)(xue)(xue)(xue)的(de)(de)(de)准确时间(jian)(jian)，因为抽血(xue)(xue)(xue)(xue)与离(li)心(xin)之间(jian)(jian)的(de)(de)(de)时间(jian)(jian)间(jian)(jian)隔可能是一(yi)个影(ying)响因素。外(wai)泌(mi)(mi)(mi)体(ti)(ti)在(zai)(zai)抽血(xue)(xue)(xue)(xue)后(hou)30分钟内是比较(jiao)稳(wen)定(ding)的(de)(de)(de)，若(ruo)时间(jian)(jian)过长将导致外(wai)泌(mi)(mi)(mi)体(ti)(ti)数量增加(jia)。血(xue)(xue)(xue)(xue)小板(ban)极易因抽血(xue)(xue)(xue)(xue)时的(de)(de)(de)物理因素而并(bing)释放出外(wai)泌(mi)(mi)(mi)体(ti)(ti)，其中(zhong)包括(kuo)接(jie)触、压(ya)力、切力。2、抽血(xue)(xue)(xue)(xue)时间(jian)(jian)。除了血(xue)(xue)(xue)(xue)液(ye)黏度，体(ti)(ti)内血(xue)(xue)(xue)(xue)液(ye)的(de)(de)(de)各项(xiang)(xiang)指标在(zai)(zai)1天中(zhong)变化很大。生(sheng)理节律会对(dui)(dui)血(xue)(xue)(xue)(xue)小板(ban)的(de)(de)(de)产(chan)生(sheng)很大的(de)(de)(de)影(ying)响。白细(xi)胞(bao)的(de)(de)(de)募(mu)集和(he)(he)循环系(xi)统中(zhong)促炎细(xi)胞(bao)和(he)(he)细(xi)胞(bao)会随(sui)时间(jian)(jian)变化。大量的(de)(de)(de)具有(you)特(te)殊表面分子的(de)(de)(de)微(wei)粒也被证明会随(sui)时间(jian)(jian)变化。目(mu)前尚(shang)无设计较(jiao)好(hao)的(de)(de)(de)实验对(dui)(dui)证实不(bu)同时间(jian)(jian)血(xue)(xue)(xue)(xue)液(ye)中(zhong)外(wai)泌(mi)(mi)(mi)体(ti)(ti)的(de)(de)(de)变化，故(gu)应(ying)在(zai)(zai)相(xiang)同的(de)(de)(de)时间(jian)(jian)采集样本(ben)。目(mu)前饮食是否会对(dui)(dui)EV产(chan)生(sheng)影(ying)响尚(shang)未可知(zhi)，但(dan)是由于(yu)脂蛋白可运(yun)载RNA且食物的(de)(de)(de)摄取(qu)可以影(ying)响循环脂蛋白颗粒的(de)(de)(de)类型、数量和(he)(he)作用，故(gu)抽血(xue)(xue)(xue)(xue)可在(zai)(zai)较(jiao)后(hou)一(yi)次用餐后(hou)一(yi)段确定(ding)的(de)(de)(de)时间(jian)(jian)进行。这些试(shi)(shi)(shi)剂(ji)盒不(bu)需(xu)要特(te)殊设备，随(sui)着(zhe)产(chan)品不(bu)断更新换代，提取(qu)效率和(he)(he)纯化效果逐渐(jian)提高。金华正规外(wai)泌(mi)(mi)(mi)体(ti)(ti)提取(qu)试(shi)(shi)(shi)剂(ji)厂(chang)家批发价

外(wai)泌(mi)(mi)(mi)(mi)体(ti)(ti)在肺(fei)病(bing)(bing)(bing)(bing)进(jin)(jin)程中的(de)(de)(de)(de)(de)作用：肺(fei)病(bing)(bing)(bing)(bing)细胞(bao)来源外(wai)泌(mi)(mi)(mi)(mi)体(ti)(ti)（LCC-exosome）可(ke)以(yi)通(tong)过刺激一些病(bing)(bing)(bing)(bing)症(zheng)血(xue)管(guan)(guan)(guan)的(de)(de)(de)(de)(de)形(xing)成来促(cu)进(jin)(jin)一些病(bing)(bing)(bing)(bing)症(zheng)的(de)(de)(de)(de)(de)生长。据相关报道称，LCC-exosome中的(de)(de)(de)(de)(de)miR-210可(ke)以(yi)通(tong)过调(diao)节基质细胞(bao)中酪氨酸受体(ti)(ti)激酶(mei)A3的(de)(de)(de)(de)(de)含量(liang)，促(cu)进(jin)(jin)一些病(bing)(bing)(bing)(bing)症(zheng)血(xue)管(guan)(guan)(guan)的(de)(de)(de)(de)(de)生成；而(er)LCC-exosome中的(de)(de)(de)(de)(de)miR-23a则可(ke)以(yi)通(tong)过启动脯氨酰羟化酶(mei)及压(ya)制紧密结合蛋白ZO-1来促(cu)进(jin)(jin)肺(fei)病(bing)(bing)(bing)(bing)的(de)(de)(de)(de)(de)生血(xue)管(guan)(guan)(guan)作用。此外(wai)，有研究发现(xian)(xian)，外(wai)泌(mi)(mi)(mi)(mi)体(ti)(ti)中的(de)(de)(de)(de)(de)内容物可(ke)以(yi)触发上皮-间质转化（EMT）。晚(wan)期肺(fei)病(bing)(bing)(bing)(bing)患者血(xue)清中外(wai)泌(mi)(mi)(mi)(mi)体(ti)(ti)波(bo)形(xing)蛋白表(biao)达(da)增加，促(cu)使人正常支气(qi)管(guan)(guan)(guan)上皮细胞(bao)出现(xian)(xian)EMT，从而(er)使肺(fei)支气(qi)管(guan)(guan)(guan)正常上皮细胞(bao)出现(xian)(xian)增殖，迁移能力。色谱法(fa)。这种方法(fa)分离到(dao)的(de)(de)(de)(de)(de)外(wai)泌(mi)(mi)(mi)(mi)体(ti)(ti)在电镜下(xia)大小均一，但是需要特殊(shu)的(de)(de)(de)(de)(de)设(she)备(bei)，应(ying)用不普遍济(ji)南外(wai)泌(mi)(mi)(mi)(mi)体(ti)(ti)提取试(shi)剂厂家供(gong)应(ying)获得的(de)(de)(de)(de)(de)外(wai)泌(mi)(mi)(mi)(mi)体(ti)(ti)纯(chun)度(du)较(jiao)高，但步骤(zhou)繁(fan)琐(suo)，耗(hao)时(shi)。

外(wai)(wai)(wai)泌(mi)体(ti)(ti)(ti)可通过(guo)流式、WB（检测指标有(you)(you)CD9,CD63,CD81）、电镜观察、NTA粒径追(zhui)踪等(deng)手段检测，普遍(bian)应用于药(yao)物(wu)载体(ti)(ti)(ti)、疾(ji)病(bing)诊断marker、精细(xi)(xi)医疗、一些(xie)病(bing)症(zheng)治病(bing)等(deng)方面研究(jiu)。由于外(wai)(wai)(wai)泌(mi)体(ti)(ti)(ti)直(zhi)径小，样本含(han)量低(di)，提(ti)取十分困(kun)难。已有(you)(you)的(de)(de)外(wai)(wai)(wai)泌(mi)体(ti)(ti)(ti)分离(li)方式有(you)(you)密度梯度离(li)心(xin)(xin)、超(chao)滤(lv)离(li)心(xin)(xin)法(fa)、免(mian)疫(yi)磁(ci)珠抗体(ti)(ti)(ti)捕(bu)获、商用试剂盒等(deng)。但到目前为止，仍没有(you)(you)一种提(ti)取方法(fa)能(neng)同时保(bao)证(zheng)外(wai)(wai)(wai)泌(mi)体(ti)(ti)(ti)的(de)(de)含(han)量、纯度以及(ji)生(sheng)物(wu)活(huo)性。外(wai)(wai)(wai)泌(mi)体(ti)(ti)(ti)是细(xi)(xi)胞间进行物(wu)质(zhi)运输和(he)信(xin)息交(jiao)流的(de)(de)重要工具(ju)，可以通过(guo)调节免(mian)疫(yi)功能(neng)促进一些(xie)病(bing)症(zheng)的(de)(de)增殖，血管新生(sheng)和(he)一些(xie)病(bing)症(zheng)转移。与(yu)细(xi)(xi)菌传染，帮助细(xi)(xi)菌逃避免(mian)疫(yi)关系(xi)很大，并与(yu)心(xin)(xin)血管疾(ji)病(bing)，老(lao)年痴呆(dai)等(deng)疾(ji)病(bing)具(ju)有(you)(you)密切(qie)关系(xi)

外(wai)(wai)泌(mi)(mi)(mi)体(ti)表(biao)面有(you)其(qi)特(te)异性(xing)标(biao)记物(wu)(wu)（如CD63、CD9蛋(dan)白(bai)），用(yong)(yong)(yong)包被抗标(biao)记物(wu)(wu)抗体(ti)的(de)(de)磁珠(zhu)与外(wai)(wai)泌(mi)(mi)(mi)体(ti)囊泡孵(fu)育后结(jie)合，即可将外(wai)(wai)泌(mi)(mi)(mi)体(ti)吸附(fu)并分(fen)(fen)离出来(lai)。磁珠(zhu)法具有(you)特(te)异性(xing)高、操(cao)作简便、不(bu)(bu)(bu)影响外(wai)(wai)泌(mi)(mi)(mi)体(ti)形态(tai)完整等(deng)优(you)点，但(dan)是效(xiao)率(lv)低，外(wai)(wai)泌(mi)(mi)(mi)体(ti)生(sheng)物(wu)(wu)活性(xing)易受pH和盐浓(nong)度影响，不(bu)(bu)(bu)利(li)于下游(you)实验，难以普(pu)遍普(pu)及。聚乙(yi)二醇(chun)（PEG）可与疏水(shui)性(xing)蛋(dan)白(bai)和脂质分(fen)(fen)子结(jie)合共沉(chen)淀，早先应用(yong)(yong)(yong)于从血清(qing)等(deng)样(yang)本中收(shou)集(ji)菌类(lei)，现在也被用(yong)(yong)(yong)来(lai)沉(chen)淀外(wai)(wai)泌(mi)(mi)(mi)体(ti)，其(qi)原理可能与竞争性(xing)结(jie)合游(you)离水(shui)分(fen)(fen)子有(you)关。利(li)用(yong)(yong)(yong)PEG沉(chen)淀外(wai)(wai)泌(mi)(mi)(mi)体(ti)存在不(bu)(bu)(bu)少问题(ti)：比如纯度和回(hui)收(shou)率(lv)低，杂蛋(dan)白(bai)较多（假阳(yang)(yang)性(xing)），颗(ke)粒大小不(bu)(bu)(bu)均一，产生(sheng)难以去(qu)除的(de)(de)聚合物(wu)(wu)，机械力(li)或者吐温(wen)-20等(deng)化学(xue)添加物(wu)(wu)将会破坏外(wai)(wai)泌(mi)(mi)(mi)体(ti)等(deng)，因此发表(biao)文章时易受质疑。如纯度和回(hui)收(shou)率(lv)低，杂蛋(dan)白(bai)较多（假阳(yang)(yang)性(xing)），颗(ke)粒大小不(bu)(bu)(bu)均一，产生(sheng)难以去(qu)除的(de)(de)聚合物(wu)(wu)。色(se)谱法。这种方法分(fen)(fen)离到(dao)的(de)(de)外(wai)(wai)泌(mi)(mi)(mi)体(ti)在电镜下大小均一，但(dan)是需要特(te)殊的(de)(de)设(she)备，应用(yong)(yong)(yong)不(bu)(bu)(bu)普(pu)遍。

外(wai)(wai)泌体(ti)(ti)(ti)的形(xing)(xing)成(cheng)(cheng)(cheng)(cheng)与(yu)鉴定：首先，细(xi)胞(bao)(bao)膜(mo)内(nei)(nei)陷形(xing)(xing)成(cheng)(cheng)(cheng)(cheng)一(yi)个杯状结构(gou)，包(bao)括细(xi)胞(bao)(bao)表(biao)面(mian)(mian)(mian)蛋白和(he)(he)与(yu)细(xi)胞(bao)(bao)外(wai)(wai)环(huan)境相关的可(ke)溶(rong)性蛋白，导(dao)致(zhi)早(zao)期胞(bao)(bao)内(nei)(nei)体(ti)(ti)(ti)(early-sortingendosome，ESE)的从(cong)头形(xing)(xing)成(cheng)(cheng)(cheng)(cheng)，或者是(shi)杯状结构(gou)直接和(he)(he)已经存(cun)在的ESEs融合(he)；trans-高尔基(ji)体(ti)(ti)(ti)和(he)(he)内(nei)(nei)质网也能协(xie)助形(xing)(xing)成(cheng)(cheng)(cheng)(cheng)ESEs。ESE成(cheng)(cheng)(cheng)(cheng)熟后(hou)形(xing)(xing)成(cheng)(cheng)(cheng)(cheng)晚期胞(bao)(bao)内(nei)(nei)体(ti)(ti)(ti)(late-sortingendosomes，LSEs)，较终形(xing)(xing)成(cheng)(cheng)(cheng)(cheng)MVBs(也称为(wei)多囊内(nei)(nei)小体(ti)(ti)(ti))。MVBs是(shi)通过endosome限制膜(mo)向内(nei)(nei)凹(ao)(即质膜(mo)双凹(ao))形(xing)(xing)成(cheng)(cheng)(cheng)(cheng)的，这(zhei)一(yi)过程导(dao)致(zhi)MVBs含(han)有多个ILVs。MVB可(ke)以(yi)与(yu)溶(rong)酶(mei)体(ti)(ti)(ti)或自噬体(ti)(ti)(ti)融合(he)，较终降解或与(yu)质膜(mo)融合(he)释(shi)放作为(wei)外(wai)(wai)泌体(ti)(ti)(ti)的ILVs。外(wai)(wai)泌体(ti)(ti)(ti)表(biao)面(mian)(mian)(mian)蛋白包(bao)括四聚体(ti)(ti)(ti)蛋白、整合(he)蛋白、免(mian)疫调节(jie)蛋白等。外(wai)(wai)泌体(ti)(ti)(ti)可(ke)以(yi)包(bao)含(han)不同(tong)类型的细(xi)胞(bao)(bao)表(biao)面(mian)(mian)(mian)蛋白、细(xi)胞(bao)(bao)内(nei)(nei)蛋白、RNA、DNA、氨(an)基(ji)酸和(he)(he)代谢物。使(shi)用(yong)可(ke)截留(liu)100KD分(fen)子量(liang)的膜(mo)，通过离心截留(liu)上清中的外(wai)(wai)泌体(ti)(ti)(ti)，截留(liu)完成(cheng)(cheng)(cheng)(cheng)后(hou)利用(yong)不同(tong)截留(liu)相对分(fen)子质量(liang)(MWCO)的超滤膜(mo)对样品进行(xing)选择性分(fen)离，便可(ke)获(huo)得外(wai)(wai)泌体(ti)(ti)(ti)。正规外(wai)(wai)泌体(ti)(ti)(ti)提取试剂销售(shou)厂家

外泌体(ti)（Exosome）发现于1986年，是(shi)一种直径(jing)约30~100nm的双层膜囊泡状结(jie)构小体(ti)。金华正(zheng)规外泌体(ti)提取试剂厂家批发价

外(wai)(wai)(wai)泌(mi)(mi)(mi)(mi)(mi)体(ti)(ti)(ti)(ti)的(de)生物学功能研究中(zhong)需要分离完整的(de)外(wai)(wai)(wai)泌(mi)(mi)(mi)(mi)(mi)体(ti)(ti)(ti)(ti)颗(ke)粒(li)，而传统超速离心方法(fa)步骤繁琐(suo)、硬件要求高(gao)、操作难度(du)大(da)。李记生物自主开发(fa)的(de)外(wai)(wai)(wai)泌(mi)(mi)(mi)(mi)(mi)体(ti)(ti)(ti)(ti)快速提取试(shi)剂(ji)盒，组分经(jing)过(guo)优化处(chu)理(li)，适用(yong)(yong)于细胞培养上清(qing)液(ye)(ye)、血(xue)(xue)清(qing)、血(xue)(xue)浆、尿液(ye)(ye)及其(qi)他体(ti)(ti)(ti)(ti)液(ye)(ye)（脑脊液(ye)(ye)、腹水、羊水、乳汁以(yi)及唾液(ye)(ye)等(deng)(deng)）中(zhong)的(de)外(wai)(wai)(wai)泌(mi)(mi)(mi)(mi)(mi)体(ti)(ti)(ti)(ti)提取，并搭配纯化过(guo)滤装置，可(ke)快速高(gao)效地(di)获(huo)(huo)得高(gao)纯度(du)外(wai)(wai)(wai)泌(mi)(mi)(mi)(mi)(mi)体(ti)(ti)(ti)(ti)颗(ke)粒(li)。注意事项：1.对于待测(ce)样品(pin)粘度(du)过(guo)大(da)时，可(ke)将样本用(yong)(yong)4℃预冷的(de)1×PBS缓冲液(ye)(ye)进行(xing)等(deng)(deng)体(ti)(ti)(ti)(ti)积稀释(shi)处(chu)理(li)。2.当血(xue)(xue)清(qing)、血(xue)(xue)浆、唾液(ye)(ye)等(deng)(deng)样品(pin)收获(huo)(huo)的(de)外(wai)(wai)(wai)泌(mi)(mi)(mi)(mi)(mi)体(ti)(ti)(ti)(ti)浓度(du)较高(gao)，收获(huo)(huo)的(de)外(wai)(wai)(wai)泌(mi)(mi)(mi)(mi)(mi)体(ti)(ti)(ti)(ti)颗(ke)粒(li)无法(fa)通过(guo)EPF柱(zhu)纯化时，可(ke)用(yong)(yong)4℃预冷的(de)1×PBS进行(xing)稀释(shi)后再通过(guo)EPF柱(zhu)离心。3.针对外(wai)(wai)(wai)泌(mi)(mi)(mi)(mi)(mi)体(ti)(ti)(ti)(ti)标(biao)志蛋白(bai)（CD63,CD9,CD81等(deng)(deng)）进行(xing)Westernblot检测(ce)，可(ke)以(yi)鉴定所提的(de)外(wai)(wai)(wai)泌(mi)(mi)(mi)(mi)(mi)体(ti)(ti)(ti)(ti)。通过(guo)超速离心(120000g/分钟)20小时以(yi)上才能获(huo)(huo)得足(zu)够(gou)的(de)外(wai)(wai)(wai)泌(mi)(mi)(mi)(mi)(mi)体(ti)(ti)(ti)(ti)量(liang)。金华正规外(wai)(wai)(wai)泌(mi)(mi)(mi)(mi)(mi)体(ti)(ti)(ti)(ti)提取试(shi)剂(ji)厂家批(pi)发(fa)价